細胞凍存密度

用途與描述

1、無血清細胞凍存液用于免疫細胞及干細胞的存儲。
2、細胞保藏中心，無血清細胞凍存液用于細胞株的長期保存。
3、科研高校，無血清細胞凍存液用于細胞株凍存。
4、無血清細胞凍存液用于醫(yī)院樣本庫細胞樣本保存。

支持高密度凍存MSC細胞（1-2x10⁷ cells/mL），為常規(guī)血清凍存液的10倍。

無血清細胞凍存液，含多種保護劑成分，一些保護劑，易于穿透細胞,避免細胞內部水分子形成冰晶損傷細胞，
同時另一些保護劑不能穿透細胞，但可以在冰晶形成之前，優(yōu)先結合細胞外的水分子，降低細胞外溶液的電解
質濃度，減少陽離子進入細胞的數(shù)量。

我公司無血清細胞凍存液，為多種保護劑組合，在細胞內外進行雙重保護，大大提高了細胞復蘇存活率。

主要成分

無血清細胞凍存液的主要成分：氨基酸，維生素，無機鹽，白蛋白，冷凍保護劑。

使用方法

1、細胞凍存前準備

a)要求凍存的細胞在對數(shù)生長期，且活率大于90%。
b)計算細胞密度，一般要求密度在1-3x10⁶ cells/mL，不同細胞系請參照附表。 

2、細胞凍存過程

a）將要凍存的細胞懸液，進行細胞計數(shù)，計數(shù)后離心，800轉，3min即可。
b）棄去上清，將4度保存的無血清凍存液緩慢加入離心后的細胞沉淀中，根據(jù)密度調整細胞凍存液用量。
c）反復吹吸混勻后，分裝于細胞凍存管中，每管500ul-1000ul（建議500ul/管）。
d）將分裝好的細胞凍存管，直接置于-80度冰箱過夜保存，次日投入液氮中保存即可。

特別提醒：

1.凍存過程中，第2步和第3步在冰袋附近操作時，低溫避免保護劑對細胞造成損傷。
2.細胞凍存管一定要保證密封，否則在復蘇過程中有可能會炸裂。

3、細胞復蘇過程

a）提前開啟水浴鍋，溫度調節(jié)到37度。
b）將凍存的細胞冷凍管從液氮中取出，迅速置于水浴鍋中，盡量1min內融化，時間越短對細胞影響越小。
c）將融化后的含細胞的冷凍保存液迅速析出置于新鮮培養(yǎng)基中充分混勻（如細胞冷凍保存液為500ul，則
加入到5ml新鮮培養(yǎng)基中，如細胞冷凍保存液位1ml，則加入10ml新鮮培養(yǎng)基中。）
d）混勻后立即離心，800轉，3min即可，離心結束后棄上清，加入預溫的新鮮培養(yǎng)液。
e）混勻后分瓶置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。（二氧化碳濃度根據(jù)培養(yǎng)基要求決定，通常為5%）

免疫細胞凍存時間與復蘇活率對照表

MSC細胞凍存時間與復蘇活率對照表

無血清細胞凍存液與含血清細胞凍存細胞復蘇對比

一種無血清細胞凍存液號：ZL201710484789.6